Optimización del protocolo para el marcador molecular de los alelos elF4E del gen bc-3 de resistencia al virus del mosaico necrótico en frijol

Cargando...
Miniatura
Publicado
Fecha
2013
Título de la revista
ISSN de la revista
Título del volumen
Editor
Zamorano: Escuela Agrícola Panamericana, 2013.
Resumen
El frijol común (Phaseolus vulgaris) es uno de los granos básicos de mayor importancia en centro américa, por ser una fuente de proteína para la alimentación humana y su cultivo un generador de ingresos y empleo rural. El virus del mosaico común necrótico (VCMN) es el virus más común y destructivo que infecta al frijol común; pertenece al género Potyvirus, y se encuentra distribuido a escala mundial. El VCMN es de tipo no persistente, y es diseminado a través de la semilla infectada. Una estrategia eficaz de control es el uso de variedades resistentes con la combinación del gen i y el gen bc-3; sin embargo, solo las variantes homocigotas recesivas (elF4E2/ elF4E2) del gen bc-3 presentan la resistencia al VCMN. El objetivo del estudio fue optimizar el protocolo del marcador molecular ENM de tipo CAPS y la enzima de restricción Rsal para determinar la presencia del gen bc3 y sus alelos elf4e2, en cuatro genotipos de frijol (Raven, Xrav40-4, DPC-40 y Widusa). El protocolo optimizado se validó en una población de 92 plantas F2 de la cruza Amadeus 77/Raven, segregando por la presencia del gen recesivo bc-3. El protocolo fue adaptado a las condiciones del laboratorio de biotecnología aplicada de Zamorano, para ser usado en la selección asistida con marcadores de germoplasma de frijol resistente al VCMN. Las principales modificaciones para la optimización del protocolo del gen bc-3 fueron en las concentraciones de ADN, Taq polimerasa y ddH₂O; la modificación del perfil térmico a 61.6 °C para la temperatura de acoplamiento; y el empleo de 40 ciclos en la PCR. Para el protocolo de la enzima de restricción Rsal, usada para separar el gen bc3 en sus alelos elF4E, se utilizaron 10 uL de producto de la PCR, 3 μL de colorante de carga, lográndose un corrido limpio y uniforme en la electroforesis. La prueba del χ2 (Chi-cuadrado) en la población F2 indicó el ajuste de los datos observados a la segregación esperada (3 susceptibles: 1 resistente), obteniéndose un valor significativo (p= 0.20> 0.05).
Descripción
Palabras clave
Phaseolus vulgaris L., Reacción en cadena de la polimerasa, Resistencia genética a virus, Selección asistida con marcadores
Citación