Clonación y expresión del gen sintético de la neurotoxina recombinante específica para insectos del Androctonus australis Hector (AaHIT) en Escherichia coli
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Fecha
2016
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Editor
Zamorano: Escuela Agrícola Panamericana, 2016
Resumen
La toxinología y la recombinación con fines biotecnológicos ha tomado importancia por los múltiples hallazgos e impactos en farmacia, agricultura y para reducir el impacto ambiental antropogénico. La AaHIT es una neurotoxina polipéptidica de 65-70 residuos de aminoácidos específica para insectos y producida por el Androctonus autralis. El objetivo de este estudio fue el diseño, clonación, estandarización y transformación de las cepas de Escherichia coli DH5α y BL21 con la secuencias sintética de AaHIT y GFP. Esta secuencia formulada tiene un promotor regulado por IPTG para las secuencias de interés GFP y la AaHIT. La construcción se sintetizó y se clonó en el plásmido pUC57. La inducción para la producción de AaHIT mediante la activación del promotor regulado por IPTG se evaluó a 31° C y 37° C, pero no se encontró diferencias en la expresión. La transformación con el vector pUC57 fue positiva y se denota con la presencia del inserto por resistencia a medio con ampicilina. Mediante electroforesis en geles de poliacrilamida SDS-PAGE se verificó la producción proteína reportera GFP de 37 kDa y a simple vista se corroboró la fluorescencia verde en las dos cepas, sin embargo, la intensidad y presencia fue mayor en las cepas de DH5α. En cuanto a la AaHIT recombinante no se observó la banda esperada de 7kDa.
Descripción
Palabras clave
Biología sintética, Biotecnología ambiental, Toxinología