Optimización de un sistema de diagnóstico utilizando tarjetas FTA® y PCR en tiempo real para la detección del fitoplasma causante del Amarillamiento Letal del Cocotero

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Fecha
2010
Autores
Castro A., Alejandro
Título de la revista
Revista ISSN
Título del volumen
Editor
Zamorano: Escuela Agrícola Panamericana, 2012
Resumen
Castro A. A. 2010. Optimización de un sistema de diagnóstico utilizando tarjetas FTA® y PCR en tiempo real para la detección del fitoplasma causante del Amarillamiento Letal del Cocotero. Proyecto especial de graduación del programa de Ingeniería Agronómica. EAP, Zamorano. Honduras. 32 p. El Amarillamiento Letal del Cocotero (ALC), una enfermedad causada por el fitoplasma Candidatus Phytoplasma palmarum, es el principal responsable de la alta mortalidad de cocoteros en muchos países del continente Americano y Africano. Variedades tolerantes han mostrado una preocupante erosión de la resistencia genética a la enfermedad. No existe ninguna cura o aplicación química de manejo, y una práctica común para manejar el ALC en plantaciones y zonas afectadas, es el corte y la quema de palmas infectadas para disminuir el inoculo. Antes de cortar una palma con síntomas y las palmas asintomáticas colindantes que ya pueden albergar el patógeno, es necesario confirmar la infeccion por el ALC. Este estudio buscó la selección de la mejor prueba de diagnóstico para el ALC, tomando en cuenta los factores como reproducibilidad, especificidad, y sensibilidad. Se validaron los parámetros considerados críticos para la cinética de la reacción de PCR utilizada convencionalmente para el diagnóstico del ALC. Estos incluyen la toma de muestra de la palma, el almacenamiento del tejido, la extracción del ADN total de la muestra, la amplificación del ADN del patógeno (copia del gen marcador por PCR), la visualización del ADN y la interpretación de resultados (falsos positivos y negativos). Se validaron nuevas tecnologías de toma de muestras y almacenamiento con tarjetas FTA®, y la amplificación del ADN del patógeno por PCR en tiempo real (RT-PCR por sus siglas en inglés). El RT-PCR es una tecnología mejorada y de segunda generación, comparada al PCR convencional. El estudio estableció que el uso de tarjetas FTA® para la toma y almacenamiento de muestras es el más eficiente, ya que elimina la necesidad de extracción de ADN con compuestos tóxicos como el mercaptoetanol, un antioxidante para proteger el ADN, utilizado en los buffers de extracción convencional. Asimismo, la técnica de RT-PCR con SYBRGreen fue seleccionada como la mejor para la amplificación del ADN. Comparada con el PCR convencional, el RT-PCR es una prueba menos costosa para análisis de ADN, es cualitativa y cuantitativa ya que mide la concentración del ADN amplificado, y reduce el tiempo del proceso por tener ciclos más cortos de amplificación del ADN y por eliminar toda la fase de electroforesis.
Descripción
32 p.
Palabras clave
ADN, ALC, Extracción, Métodos, Tejidos
Citación
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