Escuela Agrícola Panamericana, Zamorano Departamento de Ciencia y Producción Agropecuaria Ingeniería Agronómica Proyecto Especial de Graduación Efecto de los reguladores de crecimiento en la multiplicación in vitro de plátano (Musa × paradisiaca L.): Revisión de Literatura Estudiante Roberto Mario Valle Torres Asesoras María Alexandra Bravo, M.Sc. Cinthya Martínez, MAE Honduras, agosto 2021 2 Autoridades TANYA MÜLLER GARCÍA Rectora ANA MARGARITA MAIER ACOSTA Vicepresidenta y Decana Académica ROGEL CASTILLO Director Departamento de Ciencia y Producción Agropecuaria HUGO ZAVALA MEMBREÑO Secretario General 3 Contenido Índice de Cuadros.................................................................................................................................... 4 Resumen ................................................................................................................................................. 5 Abstract ................................................................................................................................................... 6 Introducción ............................................................................................................................................ 7 Metodología ............................................................................................................................................ 9 Revisión de Literatura ........................................................................................................................... 10 Establecimiento in vitro ........................................................................................................................ 10 Multiplicación in vitro de Plátano ......................................................................................................... 11 Reguladores de Crecimiento en Micropropagación de Plátano ........................................................... 11 Citoquininas en la Multiplicación in vitro de Plátano ........................................................................... 12 Auxinas en la Multiplicación de Plátano ............................................................................................... 14 Giberelinas ............................................................................................................................................ 15 Brasinoesteroides ................................................................................................................................. 16 Organogénesis Directa a Partir de Meristemos .................................................................................... 17 Medios de Cultivo para Multiplicación in vitro de Plátano ................................................................... 18 Conclusión ............................................................................................................................................. 21 Recomendación .................................................................................................................................... 22 Referencias ............................................................................................................................................ 23 4 Índice de Cuadros Cuadro 1 Efecto de fitohormonas en el número de brotes por explante en genotipo de plátano cultivados in vitro. ........................................................................................................................ 13 Cuadro 2 Medio de cultivo Murashige y Skoog modificado para la multiplicación in vitro de plátano. ...................................................................................................................................................... 19 Cuadro 3 Medio de cultivo Krikorian y Cronauer modificado para la multiplicación in vitro de plátano. ...................................................................................................................................................... 20 5 Resumen El plátano (Musa × paradisiaca L.), es una de las frutas tropicales más importantes a nivel mundial, siendo esta una parte esencial de la dieta diaria para los habitantes de más de cien países tropicales. El plátano no produce semillas, por lo cual se reproduce de manera vegetativa, no obstante, en los últimos años se implementó la práctica de multiplicación in vitro la cual consiste en la producción de una planta en un ambiente artificial controlado con un medio de cultivo con el propósito de obtener plantas con las características similares a la planta que donó los explantes. El objetivo de esta revisión de literatura fue conocer la importancia de los reguladores de crecimiento en la multiplicación in vitro de plátano. La revisión se realizó entre el mes de enero y julio del año 2021, la información fue obtenida mediante artículos científicos sobre la multiplicación in vitro del plátano, usando información a partir de los últimos 30 años, haciendo énfasis en la información de años actuales. El uso de reguladores de crecimiento es fundamental para la multiplicación in vitro del plátano, haciendo énfasis en las citoquininas (BAP) que inducen más brotes por explante, con una dosis de 3 a 5 mg/L dependiendo el genotipo cultivado. Palabras clave: citoquininas, cultivo in vitro, reguladores de crecimiento, platano, genotipo. 6 Abstract The banana (Musa × paradisiaca L.) is one of the most important tropical fruits worldwide, being an essential part of the daily diet for the inhabitants of more than one hundred tropical countries. The banana is a plant incapable of producing seeds, which is why it is limited in reproducing vegetatively, however, in recent years the practice of in vitro multiplication was implemented, which consists of the production of a plant in an artificial environment. controlled with a culture medium in order to obtain plants with similar characteristics to the plant that donated the explants. The objective of this literature review was to know the importance of growth regulators in the in vitro multiplication of plantain. The review was carried out between the month of January and July of the year 2021, the information was obtained through scientific articles on the in vitro multiplication of the banana, using information from the last 30 years, emphasizing the information of current years. The use of growth regulators is essential for the in vitro multiplication of plantain, with emphasis on cytokinins (BAP) that induce more shoots per explant, with a dose of 3 to 5 mg / L depending on the cultured genotype. Keywords: Cytokinins, growth regulators, in vitro tissue culture, plantain. 7 Introducción El plátano (Musa × paradisiaca L.), es una de las frutas tropicales más importantes a nivel mundial, según la FAO en el 2018 el mayor exportador de plátano es India, seguido de China, Ecuador, Brasil e Indonesia (FAO 2018). El plátano es una fruta importante debido a que esta forma parte esencial de la dieta diaria para los habitantes de más de cien países tropicales y subtropicales; también brinda una gran fuente de empleos e ingresos a todos aquellos que se dedican a producir este cultivo (Álvarez Morales et al. 2020). El plátano pertenece a la familia de las Musáceas, el origen de la planta es en la península Malaya, en cambio, el origen comercial se dio en las Islas Canarias de España (Belalcázar Carvajal 1991). Alrededor del mundo hay 5.8 millones de hectáreas cultivadas de plátano, las cuales produjeron 39 millones de toneladas de frutos frescos (FAO 2018). El plátano es una planta que no produce semillas, por lo cual se propaga de manera vegetativa también conocida como convencional o tradicional (Staver y Lescot 2015). La planta produce un material vegetativo conocido como colinos, cormos, hijos o cepas; es la principal vía para la transmisión de las características genéticas deseables, no obstante, también es un método de diseminación de plagas y enfermedades (Gomez y Palencia 2006). (Palencia et al. 2006) La propagación tradicional trata del uso de cormos y resembrarlos o dejarlos crecer para que sean hijos de la planta, y poder continuar su producción. Actualmente se está implementando otro método de propagación, La micropropagación in vitro, esta propagación permite la obtención plántulas sanas, vigorosas y de buena calidad; consiste en tomar una porción de una planta y colocarla en un medio nutritivo estéril donde se regeneran una o muchas plantas, también debe tener control del ambiente, tanto físico como químico (Castillo 2004). La micropropagación de plátano consiste en la producción de plántulas con las características similares a la planta que donó los explantes y plantas sanas, los primeros trabajos de producción in vitro del plátano fueron realizados en 1980. Los medios de cultivo incluyen distintas sales minerales, 8 una fuente de carbono, un suplemento vitamínico la dotación especifica de los reguladores de crecimiento (Galan et al. 2018). Se pueden obtener desde 500 a 1000 plantas de un solo meristemo, no obstante actualmente mediante una propagacion masiva, se puede obtener mínimo 1000 plantas, debido a los diversos reguladores de crecimiento que se emplean. Una fitohormona es un compuesto que produce una planta, la cual ejerce su función a muy bajas concentraciones y cuyo efecto se produce a nivel celular, ejerciendo cambios en los patrones de crecimiento de los tejidos vegetales y permitiendo su control. Las principales fitohormonas son: citoquinas, auxinas, giberelinas, brasinoesteroides y etileno (Alcantara y Acero 2019). No obstante, en la propagación in vitro se usan reguladores de crecimiento, los cuales son compuestos sintetizados químicamente por la planta, y la mayoría proviene de otros organismos, por lo general son más potentes que sus análogos naturales llamado fitohormonas. Actualmente en el mercado hay una gran variedad de fitohormonas con el fin de inducir crecimiento y desarrollo según el objetivo de la propagación. En el cultivo in vitro de plátano, las más comunes son, 6-bencilaminopurina (BAP), Ácido 1-naftalenacético (ANA) y Ácido indolacético (AIA) y Kinetina (Alcantara y Acero 2019). El objetivo de esta revisión de literatura fue conocer la importancia de los reguladores de crecimiento en la multiplicación in vitro de plátano 9 Metodología La revisión se realizó entre el mes de enero y julio del año 2021, la información fue obtenida de artículos científicos sobre la multiplicación in vitro del plátano. Las bases de datos que se usaron fueron Scielo, FAO, FAOSTAT, Research Gate y fueron seleccionadas debido a los resultados obtenidos, se usó información a partir de los últimos 30 años. La biblioteca digital que se utilizó para la investigación fue la biblioteca Wilson Popenoe perteneciente a la Escuela Agrícola Panamericana Zamorano. Las palabras clave utilizadas para la búsqueda rápida fueron: micropropagación de plátano, cultivo in vitro, plátano, multiplicación in vitro, reguladores de crecimiento, fitohormonas, micropropagation, multiplication. 10 Revisión de Literatura La propagación in vitro permite la obtención de gran cantidad de material vegetativo sano y una producción homogénea. Recientemente se está empleando la propagación in vitro debido a que los productores desean obtener una buena planta con las características similares a la planta que donó los explantes, ya que estos siempre seleccionan las plantas las cuales han tenido un desempeño sobresaliente y así obtener una buena plantación, también para producir una planta sana. Las etapas de la propagación in vitro son: Fase 0 recolección y preparación del material, Fase 1 establecimiento in vitro, Fase 2 multiplicación, Fase 3 enraizamiento y Fase 4 aclimatación. Establecimiento in vitro Para la propagación in vitro de plátano, el primer paso es la selección del material vegetativo, este es un factor que determina en muy buena la parte la calidad de las plantas que se producirán; para la selección se procede a hacer una clasificación de fincas, lotes y plantas, las fincas escogidas son las que poseen un buen manejo de cultivo, en otras palabras, un material sano el cual no haya sido atacado por virus, hongos o bacterias. Se debe escoger la planta madre de la que se obtienen los cormos o hijos que a su vez se usarán para extraer el meristemo apical, explante usado para la micropropagación. Por lo general los meristemos se extraen de los hijos de espada, los hijos de espada se distinguen por ser plantas pequeñas con hojas estrechas que terminan en forma de punta, y suelen emerger a la superficie a unos centímetros de la planta madre. Los cormos se reducen a un tamaño de 5 × 2 cm, se lavan con una solución jabonosa y se enjuagan con suficiente agua potable y luego se desinfectan con soluciones de hipoclorito de sodio (Alarcon Restrepo y Jimenez Neira 2012). Después se establecen en el medio de cultivo, en el caso del plátano los medios de cultivo más usados son el de Murashige y Skoog (MS) y el de Krikorian y Cronauer (KC), enriquecidos con vitaminas y reguladores de crecimiento. Diversos estudios demuestran que los medios de cultivo MS y KC aumentan el índice de brotes por explantes en el plátano. El establecimiento dura 60 días y se debe realizar refrescamiento de medio de cultivo cada 21 días. 11 Multiplicación in vitro de Plátano La multiplicación in vitro tiene como objetivo aumentar la cantidad de brotes para los nuevos ciclos de multiplicación, con el fin de producir la mayor cantidad de propágulos manteniendo a la estabilidad genética (Alarcon Restrepo y Jimenez Neira 2012). El proceso de multiplicación in vitro involucra los cortes o separación cada 21-35 días de los brotes que se han desarrollado, la eliminación de tejidos fenolizados y la siembra de estos brotes individuales en medio de cultivo específicamente formulado para esta etapa. Durante la multiplicación se obtienen de 500 a 1000 brotes de cada meristemo de acuerdo con la variedad (Armenia Quindio 1997). Las tasas de multiplicación que se manejan alcanzan 1000 plantas de un meristemo, debido a los diversos reguladores de crecimiento que se emplean en el proceso de multiplicación lo cual acelera y mejora el rendimiento del explante (Castillo 2004). Durante esta fase se trabaja en una cámara de flujo laminar para mantener condiciones de asepsia, se estima que los explantes que sobrevivieron a las fases de desinfección e introducción del material originen brotes de procedencia axilar. En cada frasco se forma un cormo que se desarrollará, y como se mencionó anteriormente de forma periódica los nuevos brotes se deben subcultivar (separar) y colocar en un medio de cultivo fresco para continuar la multiplicación (Castillo 2004). Reguladores de Crecimiento en Micropropagación de Plátano Las fitohormonas son compuestos sintetizados por la planta que ejercen su función con una concentración baja dando resultados a nivel celular, ayudan a la regulación fisiológica de la planta, como el crecimiento, desarrollo, elongación, floración, fructificación. Los principales reguladores de crecimiento usados para la propagación son: citoquinas, auxinas, giberelinas, brasinoesteroides. En la propagación in vitro, se usan los reguladores de crecimiento, estos son compuestos sintetizados químicamente, la mayoría son obtenidos de otros organismos y por lo general son mucho más potentes que sus análogos naturales llamados fitohormonas (Alcantara y Acero 2019). 12 Citoquininas en la Multiplicación in vitro de Plátano Las citoquininas se descubrieron en 1950 como factores que promueven la proliferación celular y mantienen el crecimiento de tejidos vegetales cultivados in vitro, la primera citoquinina descubierta fue la zeatina proveniente del endoespermo inmaduro del maíz. La citoquinina es un derivado de la base adenina la cual en su posición N6 muestra varias sustituciones, la citoquinina tienen la capacidad de iniciar y sustentar la proliferación de tejidos madre cuando eran aplicada sobre organismos vegetales en pequeñas cantidades (Alcantara y Acero 2019). Las actividades biológicas de las citoquininas dependen del sustituyente del N6, lo que las hace dividir en dos grandes clases: las citoquininas isoprenoidicas y aromáticas. Las citoquininas isoprenoidicas son las familias de la isopenteniladenina (iP), la zeatina (Z) y la dihidrozeatina (DZ), en cambio, las citoquininas aromáticas incluyen las familias de benciladenina (BA), la ortohidroxibenciladenina y la meta- hidroxibenciladenina (Cerezo 2017a). Las actividades de las citoquininas dependen de la naturaleza química como la del sustituyente del N6; la presencia de una cadena lateral en N6 es fundamental para que las citoquininas promuevan la división celular (Cerezo Martínez 2011). No obstante, por lo general las citoquininas a nivel celular pueden iniciar la división celular, que posteriormente formarán tejidos vegetales madre, estas fitohormonas se sintetizan en las células de los ápices radiculares (Gomez y Palencia 2006). Las citoquininas intervienen en: la formación de vástagos o brotes axilares en yemas apicales multiplicadas in vitro, en la apertura de estomas, supresión de la dominancia apical y en la inhibición de la senescencia de las hojas. En el caso del plátano, las citoquininas son claves en la proliferación de brotes y el alargamiento de la planta (Waman et al. 2014). No obstante, un estudio reciente de muestra que en muchas variedades las citoquininas resultan ser más efectivas, si se las emplea combinadas con auxinas (Sipen y Davey 2012). Esto debido a su alta complementariedad en la estimulación del crecimiento y desarrollo vegetal, por tal motivo si ambas tienen la misma concentración se crearán callos que son una gran cantidad de células no diferenciadas; si existe una 13 mayor concentración de citoquininas, se promueve la formación de tallos; y por el contrario si existe mayor concentración de auxinas, se promueve la formación de raíces (Alcantara y Acero 2019). La citoquinina más utilizada en laboratorios de cultivo de tejidos vegetales es el 6-Bencilaminopurina (6- BAP). Cuadro.1 Efecto de fitohormonas en el número de brotes por explante en genotipo de plátano cultivados in vitro. Regulador de crecimiento mg L-1 Genotipo Brotes/ explante Referencia BAP 4 Curaré Enano 2.75 Osorio Vega 2019 BAP 4.5 Cultivar Oniaba 13.25 Buah y Tachie-Men 2014 BAP 4.5 Apantupa 11.25 Buah y Tachie-Men 2014 BAP 6 Yangambin 9.55 Ngomuo et al. 2013 BAP + AIA 4.0 + 0.2 Curaré Enano 2.8 Osorio Vega 2019 BAP + ANA 3.0 + 1.00 Simmunds 25.8 Medina M et al. 2015 BAP + Biostana 4.0 + 0.05 Clon Sobrino 2.79 Héctor y Torres 2007 BAP + AIA 4.0 + 0.65 Clon Sobrino 2.42 Héctor y Torres 2007 BAP + AIA 5.0 + 5.00 Dominico Harton 2.25 Hoyos y Roman 2008 BAP + ANA 4.5 + 0.18 Agbagba 14.8 (Feyisola et al. 2015) Nota. aBiostan® (BB-6) brasinoesteroide. En el cuadro 1 se puede apreciar el uso repetitivo de BAP haciendo uso de 3 mg/L, hasta un máximo de 6 mg/L dependiendo del genotipo cultivado in vitro. Podemos hacer énfasis en la 14 investigación de Buah y Tachie-Men (2014), en la cual probaron dos genotipos diferentes de plátano con la misma dosis de citoquininas, la cual dio diferentes resultados, el genotipo Apantupa dio un resultado de 11.25 brotes por explantes, en cambio el genotipo Cultivar Oniaba dio 13.25, por lo que se puede deducir que, dependiendo del genotipo, reaccionará diferente a los reguladores de crecimiento. Auxinas en la Multiplicación de Plátano Las auxinas se encuentran en todos los tejidos de la planta, no obstante, la mayor concentración se encuentra en las regiones que están en crecimiento, el término auxina proviene del griego crecer o incrementar. La síntesis de las auxinas ocurre principalmente en los meristemos apicales (Jordán y Casaretto 2007). La auxina fue la primera hormona que se descubrió, específicamente el ácido indol-3-acético comúnmente llamado AIA. El descubrimiento de la auxina fue importante a mediados del año 1950 debido a que era capaz de alterar el crecimiento de la planta (Cerezo 2017b). La actividad que realiza la auxina depende de la concentración en cada órgano, esto pone en manifiesto la importancia de los mecanismos los cuales regulan eficazmente la concentración de hormonas en las plantas, con el fin de obtener una concentración óptima. Al momento de hablar de la concentración óptima de auxinas, esta depende de factores claves, los cuales son la velocidad de biosíntesis, conjugación, hidrólisis de los conjugados y oxidación, la intensidad del transporte de llegada y de salida (Cerezo 2017a). Las auxinas inducen procesos de crecimiento y desarrollo vegetativo, la auxina a nivel celular cumple con el efecto de división y elongación celular, diferenciación celular, promoción división celular meristemática, aumento del contenido osmótico celular, aumenta permeabilidad celular, aumento de producción proteica y disminución de la presión de la pared celular. En cambio, a nivel vegetativo las auxinas tienen el efecto de formación y elongación de tallos, la producción de diferentes raíces adventicias y el aumento de la dominancia apical (Alcantara y Acero 2019). 15 Las auxinas aceleran la maduración y germinación e induce la floración. No obstante, en propagación in vitro las auxinas son indispensables para la formación de raíces, por tal motivo el uso de auxinas se ve más influenciado en la fase de enraizamiento (Alcantara y Acero 2019). La aplicación de auxinas en conjunto a otros reguladores de crecimiento se concentra en aprovechar su capacidad de enraizante, así se puede usar para la propagación de diferentes materiales genéticos, por ejemplo: plantas frutales, plantas ornamentales e incluso plantas de uso industrial (Borjas et al. 2020). El balance de citoquininas y auxinas es importante en el coeficiente de multiplicación, con un balance adecuado se pueden lograr altas tazas de multiplicación. El uso de las citoquininas en el medio de cultivo varía de acuerdo con el balance endógeno de auxinas y citoquininas en los explantes. Cuando se inoculan mayores densidades de explantes por frascos, se producen una mayor cantidad de brotes y raíces, debido a que los mismos explantes contienen auxinas y citoquininas que liberan al medio de cultivo (Chavarría y Lopez Gerardo 2010). Se puede apreciar que hay genotipos de plátano que no es necesario el uso de auxinas, en la investigación de Osorio en el año 2019 se observó como la variedad Curare enano al implementarle 4 mg/L dio un resultado de 2.75 brotes por explante y al momento de agregarle 0.2 mg/L de AIA, aumenta a 2.80 brotes por explante lo cual no es un aumento considerable. Giberelinas Las giberelinas (Gas) son hormonas de crecimiento diterpenoides tetracíclicos involucrados en varios procesos de desarrollo en vegetales. El descubrimiento de las giberelinas se remonta a la época de los años 30, cuando científicos japoneses aislaron plantas de arroz causando la enfermedad de bakanoe. A pesar de haber más de 100 el número hallado en plantas, solo son pocas las cuales demuestran actividad biológica. Esta fitohormona puede ser producida por diversos microrganismos como: Bacillus spp, Lactobacillus spp, Trichoderma spp, entre otros (Alcantara y Acero 2019). La mayoría de las giberelinas no posee capacidad como tal para el desarrollo de la planta. Por lo general 16 todas las giberelinas son productos inactivos o precursores, finales o laterales, de las rutas que sintetizan las giberelinas activas, se dice que las GAs C19 que poseen grupos hidroxilo en la posición 3β, como las GAs1, GAs4, giberelinas3 y Gas7 muestran una actividad biológica elevada (Cerezo 2017a). En la síntesis de las giberelinas se ve involucrado los plastidios, el retículo endoplasmático y el citosol de la célula, también todos los tipos de giberelinas son sintetizados en la ruta del ácido mevalónico, en los plastidios se crea la formación del ent-Kaurene, este se dirige al retículo endoplasmático para transformase en Gas12 el cual se transforma en GA1 y GA4 las cuales tienen actividad biológica y son formas activas. La giberelina más usada en la agricultura es la GA3 (Borjas et al. 2020). Las giberelinas están involucradas en el desarrollo de tejidos que estén en crecimiento constante; en cambio, el ácido giberélico (GA3) juega un rol importante en la elongación de los segmentos nodales ya que permite estimular la elongación en respuesta a la luz u oscuridad (Alcantara y Acero 2019). En el caso de las giberelinas en la producción de plátano in vitro, no se enfoca tanto en la multiplicación si no, en la elongación y sobrevivencia de las plantas cuando se transfieren a ex vitro y también para mejorar el rendimiento de la planta en el campo (Suarez Padrón et al. 2020). Brasinoesteroides Los brasinoesteroides son un tipo de polihidroxiesteroides de lactona con estructura base de brasinólida que comenzaron a ser investigaos a principios de la década de 1979, cuando se dio su descubrimiento en extractos de polen pertenecientes a la especie vegetal colza (Brassica napus L.). Dentro de la fisiología vegetal los brasinoesteroides cumplen diferentes funciones porque se encuentran involucrados en la regulación del metabolismo y la señalización celular vegetal (Alcantara y Acero 2019). Se han encontrado más de 70 tipos diferentes de brasinoesteroides de análogos naturales, se dice que los brasinoesteroides son unas de las hormonas más antiguas, debido a que se 17 han encontrado en diversos organismos que presentan características vegetales como algas y plantas ancestrales (Hernandez y Garcia 2016). Se sabe que con la aplicación de diferentes tipos de brasinoesteroides se puede controlar la elongación y división celular, el crecimiento de la raíz, la regulación de la fotomorfogénesis, la diferenciación de estomas y sistema vascular, la germinación de semillas, la elongación de vasto vegetal y otras funciones que se relacionan con el control de la inmunidad y reproducción, también pueden disminuir en gran cantidad los cambios de estrés que se provocan por factores bióticos y abióticos dentro del medio de cultivo (Alcantara y Acero 2019). Héctor y Torres (2007) utilizaron el Biostan (BB-6) un análogo de brasinoesteroides sintetizado a partir de humus de lombriz, el cual se acompañó con BAP para incrementar el índice de multiplicación en el genotipo Clon sobrino (Cuadro 1). Se puede apreciar como el uso de Biostan en combinación a las auxinas con una dosis de 4.0 mg/L de BAP y 0.05 mg/L de Biostan dio un resultado de 2.79 brotes por explante, a comparación del control el cual fue 4 mg/L y 0.65 mg/L de AIA dio un resultado de 2.42 brotes por explante a comparación de la dosis con Biostan. Organogénesis Directa a Partir de Meristemos La organogénesis es un evento morfogenético, es la formación de un primordio unipolar a partir de la yema con el subsiguiente desarrollo de un brote vegetativo (Khalid y Tan 2016). La organogénesis directa es una técnica muy utilizada en el cultivo in vitro, la cual se consigue estableciendo ápices, yemas, domos y meristemas. Para el cultivo de plátano los explantes que se usan son los meristemas extraídos de cormos. La organogénesis directa es un método de regeneración de órganos, genera brotes a partir de un explante de forma directa, la organogénesis es una herramienta muy utilizada para producir masivamente plantas libres de enfermedades y con ventaja de obtener características similares; esta vía de regeneración es aconsejable en la micropropagación debido a la uniformidad de las plántulas 18 producidas, además, que el tiempo de organogénesis directa es más corto a comparación de la organogénesis indirecta (Khalid y Tan 2016). Medios de Cultivo para Multiplicación in vitro de Plátano El medio de cultivo debe de poseer los componentes básicos para obtener una respuesta adecuada. Estos componentes deben ser: macronutrientes, micronutrientes, fuentes de carbohidratos, vitaminas y reguladores de crecimiento. En el caso de las musáceas el medio de más amplia aceptación es el Murashige y Skoog (MS) (Cuadro 2) enriquecido con vitaminas y reguladores de crecimiento. El medio de cultivo se usa sólido y/o líquido. 19 Cuadro.2 Medio de cultivo Murashige y Skoog modificado para la multiplicación in vitro de plátano. Componentes Fórmula Nombre común mg/L Macroelementos NH4NO3 Nitrato de amonio 1650.000 KNO3 Nitrato de potasio 1900.000 MgSO4.7H2O Sulfato de magnesio heptahidratado 370.000 CaCl₂.2H2O Cloruro de calcio bihidratado 440.000 KH2PO4 Fosfato monobásico de potasio 170.000 Microelementos H3BO3 Ácido bórico 6.200 CoCl2.6H2O Cloruro de cobalto hexahidratado 0.025 CuSO4.5H2O Sulfato de cobre pentahidratado 0.025 KI Yoduro de potasio 0.830 MnSO4.4H2O Sulfato de manganeso tetrahidratado 22.300 Na2MoO4.2H2O Molibdato de sodio bihidratado 0.250 ZnSO4.7H20 Sulfato de zinc heptahidratado 8.600 FeNa EDTA Hierro Sodio Etilendiaminotetraacético 50.000 Vitaminas Inositol 100.000 Tiamina 0.500 Piridoxina 0.500 Ácido Nicotínico 0.500 Glicina 2.000 L-Cisteína 2.000 Carbohidratos Sacarosa 30000.000 Nota. Tomado de Hoyos y Roman (2008) En diferentes estudios se demuestra que el medio de cultivo Murashige y Skoog incrementa la tasa de multiplicación de brotes de plátano, con un aproximado de cinco brotes a comparación del medio de cultivo Krikorian y Cronauer (Cuadro 3), el cual solo alcanza un aproximado de tres brotes. 20 Cuadro..3 Medio de cultivo Krikorian y Cronauer modificado para la multiplicación in vitro de plátano. Componentes Formula Nombre comun mg/L Macroelementos CaCl2 2H2O Cloruro de calcio bihidratado 440.000 KH2PO4 Fosfato monobásico de potasio 170.000 KNO3 Nitrato de potasio 1,900.000 MgSO4 7H20 Sulfato de magnesio heptahidratado 370.000 NH4NO3 Nitrato de amonio 1650.000 Microelementos H3BO3 Acido borico 6.200 CoCl2 6H2O Cloruro de cobalto hexahidratado 0.025 CuSo45H2O sulfato de cobre pentahidratado 0.025 Kl Yoduro de potasio 0.830 MnSO4 4H2O Sulfato de manganeso tetrahidratado 22.300 Na2MoO42H2O Molibdato de sodio bihidratado 0.250 ZnSO47H2O Sulfato de zinc heptahidratado 8.600 FeNaEDTA Sal férrica sódica de ácido Etilendiaminotetraacetico 50.000 Compuestos Tiamina- HCL 1.000 Orgánicos Inositol 100.000 BAP 5.000 Sacarosa 40000.000 Nota. Tomado de Ubilla Navarro (2017) 21 Conclusión El uso de reguladores de crecimiento es fundamental para la multiplicación in vitro del plátano, haciendo énfasis en las citoquininas (BAP) que inducen más brotes por explante, con una dosis de 3 a 5 mg/L, dependiendo el genotipo cultivado. 22 Recomendación Se recomienda realizar pruebas experimentales según esta revisión de literatura para efectuar la efectividad de los reguladores de crecimiento para obtener dosis específicas de los reguladores de crecimiento para cada genotipo de plátano. 23 Referencias Alarcon Restrepo JJ, Jimenez Neira Y. 2012. Manejo fitosanitario del cultivo de plátano (Musa spp.): Medidas para la temporada invernal. Bogotá, Colombia: Produmedios (Línea Agrícola). http:// www.fao.org/fileadmin/templates/banana/documents/Docs_Resources_2015/TR4/cartilla- platano-ICA-final-BAJA.pdf. Alcantara J, Acero J. 2019. Principales reguladores hormonales y sus interacciones en el crecimiento vegetal. 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