Examinando por Autor "Lindemann, Stephen"

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    Caracterización de homopolisacáridos y evaluación de su fermentación in vitro
    (Zamorano: Escuela Agrícola Panamericana, 2018., 2018) Rosales V., Denisse L.; Cardona, Jorge; Lindemann, Stephen
    Las fibras dietéticas son investigadas debido a que incrementan sustancialmente la diversidad microbiana reduciendo la aparición de enfermedades. La diversidad de enlaces dentro de los homopolisacáridos permite la especialización entorno a la coexistencia no competitiva de organismos. Los objetivos de este estudio fueron: determinar propiedades estructurales de dextrinas y glucanos, evaluar tasa de fermentación in vitro e identificar los principales microorganismos responsables del proceso fermentativo. Los homopolisacáridos se incubaron con heces fecales en iguales concentraciones. Se midió pH y producción de gas a 4, 8, 12, 24, 36 y 48 horas. Estas muestras fueron preparadas para el análisis de ácidos grasos de cadena corta, utilizando un estándar interno. El ADN extraído de las muestras fue procesado para la identificación de microorganismos presentes en cada tratamiento. Se identificaron 13 enlaces en los homopolisacáridos evaluados con mayor diversidad en muestras elaboradas a partir de maíz. Se evidenció un crecimiento microbiológico por la reducción de pH y la producción de gas. Se promovió el crecimiento de Prevotella copri, Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcus, y Lactobacillus. En conclusión, los homopolisacáridos provenientes de maíz presentaron comportamiento similar entre sí en todas las evaluaciones a diferencia de los homopolisacáridos provenientes de tapioca y avena. Estos resultados indicaron el importante papel que desempeñan las fibras dietéticas en la modulación de la microbiota intestinal y la nutrición humana.
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    Development of a Fluorescence-Based Method to Estimate Bacterial Density in In Vitro Fermentation Studies
    (Zamorano: Escuela Agrícola Panamericana, 2023) Troncoso S., Ana V.; Gonzales, Miguel; Lindemann, Stephen; Luna, Ligia
    Human gut microbiota composition, structure, and density varies among individuals mainly due to age, eating habits, gender, and other factors. Although human microbial biodiversity varies between individuals with respect to species composition, variable fecal bacterial load may introduce an artifact during in vitro fermentations, resulting in variable fermentation outcomes in terms of metabolite production and composition and structure of the microbiota. Multiple methods have been developed for the estimation of bacterial density; however, these tend to require considerable time to obtain results and/or expensive equipment, making their use difficult for measurement of bacterial density in inoculum before in vitro experiments. Here, we describe a convenient and cost-effective method to estimate bacterial density from diluted stool by staining bacteria with a fluorophore and measuring its fluorescence intensity. For our preliminary test, Escherichia coli cells were stained with SYBR Gold, SYBR Green, and DAPI to identify the fluorophore with the highest fluorescence intensity. SYBR Gold was selected as the best fluorophore and the method was optimized by maintaining the sample wash step and fluorophore concentration. Fluorescence intensity measurements were collected on a microplate reader to assess staining efficiency and cell numbers were estimated using a hemacytometer. Finally, the method was used to estimate the bacterial density in diluted feces obtained from two donors to later use this method to test the effect of normalizing the fecal bacterial load before in vitro fermentation.